Народ, я уже просто в отчаянии. Пытаюсь клонировать ген в E. coli, используя плазмиду pUC19. Всегда все шло как по маслу, а последние три прогона — полный провал. Клетки не растут на селективной среде, или растут, но при проверке на наличие вставки — ее нет. Я уже заново синтезировал олигонуклеотиды для ПЦР, перепроверил рестрикционные сайты, перезалил сам вектор из старого рабочего клона. Может, дело в питательной среде? Или в штамме E. coli? Я понимаю, что это может быть банальная ошибка, но уже сил нет искать ее.

Может, кто-то сталкивался с подобным? Есть какие-то неочевидные моменты в работе с pUC19, о которых мало кто знает, но которые могут вызывать такую нестабильность? Может, есть какие-то новые технологии, которые помогут быстрее диагностировать проблему? Мне нужны ваши советы, иначе я скоро перестану экспериментировать вообще.

Технология CRISPR-Cas9 — это, конечно, невероятный прорыв в генной инженерии. Возможность редактировать геном буквально с ювелирной точностью открывает колоссальные перспективы: лечение наследственных заболеваний, создание новых сортов растений, борьба с вредителями. Однако, потенциал для злоупотреблений и непредвиденных последствий тоже огромен. Мы можем случайно нарушить баланс экосистемы или создать 'дизайнерских' людей. Где проходит грань между благом и риском? А вы как думаете, готовы ли мы к такому уровню вмешательства в природу?

Крáкен официальный сайт

Я вот тут задумался, а не слишком ли мы увлеклись редактированием генов? Ну то есть, конечно, это просто огонь, новые технологии открывают такие горизонты! И это ж какие перспективы для лечения наследственных болезней, просто крышесносно!

Но с другой стороны, мы же пока еще толком не понимаем всех последствий. Помните, как в старых фильмах про мутантов? А вдруг мы так, сами того не желая, создадим что-то... ну, опасное? Эти научные исследования – это же такая ответственность!

Или вот, например, дизайнерские дети. Это вообще норма или уже перебор? Я реально в восторге от потенциала, но страшно же!

Главное – не навредить!

А вы как думаете? Стоит ли так активно вторгаться в нашу ДНК?

Ребята, я в полном отчаянии. Пытаюсь с помощью CRISPR-Cas9 нокаутировать ген XYZ у мышей для своих научных исследований, но ничего не выходит. Уже третье поколение, а фенотипа ноль. Психологически тяжело, сам понимаешь. Пробовал менять sgRNA, менял концентрацию Cas9, даже плазмиды другие брал — результат нулевой.

Может, кто-то сталкивался с подобным? Есть какие-то неочевидные подводные камни именно с этим геном или с техникой самой? Какие-нибудь новые технологии, которые могли бы помочь, может? Или я просто бездарь и надо идти кофе продавать?

Ну что за подстава, прибор работал нормально три месяца, а тут решил выкинуть ошибку чтения буфера. Пробовал перезагружать, чистить кэш, переустанавливать софт — бесполезно. Теперь весь недельный цикл экспериментов коту под хвост, а сроки по гранту горят.

Может кто знает, как сбросить настройки через консоль, или лучше сразу вызывать инженеров, пока я его вообще не доломал? Жду советов, потому что нервы на пределе