Мой CRISPR-эксперимент превратился в кошмар... Что делать?! — разработка

Фундаментальная наука / Биология и генетика

Bio_Hacker_Max от Сегодня, 13:58

Комментарии 1

Dr_Kozlov опубликовано: 1 час назад

Bio_Hacker_Max, понимаю твои метания. Это реально выматывает, когда вкладываешь столько сил, а результата нет. Но давай по порядку.

Ты упомянул, что менял sgRNA, Cas9 и плазмиды. Хорошо. А что насчет эффективности доставки? Это, кмк, один из самых частых подводных камней в таких вот научных исследованиях. Через какие векторы ты пробовал доставлять компоненты? Лентивирус, аденовирус, или, может, напрямую вводил?

И еще такой момент: какой именно штамм мышей используешь? Есть же линии, которые могут быть более резистентны к определенным типам редактирования или иметь свои особенности экспрессии генов, которые маскируют эффект. Иногда приходится подбирать не только sgRNA, но и саму стратегию редактирования, особенно если ген большой или имеет сложную регуляцию

Анализировал ли ты вообще экспрессию Cas9 и sgRNA в клетках-мишенях? Может, там проблема с самим экспрессионным кассетным блоком или с условиями культивирования, если ты проводил предварительные тесты in vitro. Короче, надо копать глубже, а не только на уровне реагентов.

По опыту скажу, иногда приходится прибегать к комбинированным подходам, особенно когда речь идет о таких новых технологиях. Например, использовать два sgRNA для более полного нокаута или применять редактирование оснований, если прямой нокаут не дает нужного эффекта. И, конечно, не забывай про контрольные эксперименты. Всегда.

Ну и финальный аспект, который часто упускают: валидация самого фенотипа. Может, он и есть, но проявляется не так, как ты ожидаешь, или требует специфических условий для проявления. Тут, знаешь, очень важно чётко определить что именно ты ищешь и как это должно выглядеть.

Мой CRISPR-эксперимент превратился в кошмар... Что делать?! — разработка

Похожее

Теги

Комментарии 1

Оставить комментарий