Народ, я уже просто в отчаянии. Пытаюсь клонировать ген в E. coli, используя плазмиду pUC19. Всегда все шло как по маслу, а последние три прогона — полный провал. Клетки не растут на селективной среде, или растут, но при проверке на наличие вставки — ее нет. Я уже заново синтезировал олигонуклеотиды для ПЦР, перепроверил рестрикционные сайты, перезалил сам вектор из старого рабочего клона. Может, дело в питательной среде? Или в штамме E. coli? Я понимаю, что это может быть банальная ошибка, но уже сил нет искать ее.

Может, кто-то сталкивался с подобным? Есть какие-то неочевидные моменты в работе с pUC19, о которых мало кто знает, но которые могут вызывать такую нестабильность? Может, есть какие-то новые технологии, которые помогут быстрее диагностировать проблему? Мне нужны ваши советы, иначе я скоро перестану экспериментировать вообще.

Серьезно, сколько можно копаться в этих клетках и генах? Фундаментальная наука должна идти дальше Все эти научные исследования в биологии — это тупик. Новые технологии в этой сфере? Да ладно. Только создают больше проблем, чем решают. На мой взгляд, все эти инновации в генной инженерии и так далее — это лишь попытка залатать дыры, которые сами же и проделали. Разработка лекарств от всего? Не смешите. Реальные научные открытия ждут нас в физике, космологии, может, в какой-то совершенно новой области, о которой мы даже не подозреваем.

А ведь сколько ресурсов уходит на эту биологию, а? Имхо, мы просто тратим время.

А вы как думаете?

Ну что за подстава, прибор работал нормально три месяца, а тут решил выкинуть ошибку чтения буфера. Пробовал перезагружать, чистить кэш, переустанавливать софт — бесполезно. Теперь весь недельный цикл экспериментов коту под хвост, а сроки по гранту горят.

Может кто знает, как сбросить настройки через консоль, или лучше сразу вызывать инженеров, пока я его вообще не доломал? Жду советов, потому что нервы на пределе