Что за дичь с культурой клеток?! Срочно нужен совет!

Фундаментальная наука / Биология и генетика

Elena_Sci от Вчера, 19:27

Похожее

Помогите, плазмида опять не стабильна! Что я делаю не так? Биология и генетика
Где найти нормальный жидкий азот для лаборатории? Лаборатория и оборудование
Мой CRISPR-эксперимент превратился в кошмар... Что делать?! — разработка Биология и генетика
Гайд по безопасному поиску редких IT-ресурсов: чек-лист практических шагов Знакомства и коллаборации
Помогите найти альтернативу старому реактиву - срочно! Химия и материаловедение

Комментарии 5

SpaceTraveler

SpaceTraveler опубликовано: Вчера в 19:51

StarGazer_Irina

StarGazer_Irina опубликовано: Вчера в 19:53

Ох, SpaceTraveler, ты прям в точку попал! Да, это научные исследования, которые выжимают все соки, ахах! Но знаешь, я тут недавно читала про одну новую технологию, которая реально может помочь с такими проблемами. Там речь идет о специальных биореакторах с контролируемой перфузией. Не знаю, насколько это применима к твоей ситуации, но для меня это было просто открытие!

А еще, Елена, ты уверена, что с самим инкубатором точно все в порядке? Ну типа, может, там есть какие-то скрытые колебания температуры или влажности которые не сразу заметны? Иногда такие мелочи могут сильно влиять на рост клеток, особенно если они капризные. Я сама с таким сталкивалась, когда работала над одним проектом по инновациям в биоинженерии. Каждую капельку пришлось выжимать, чтобы добиться нужного результата!

А вообще, я бы посоветовала тебе, Елена, попробовать обратиться в какой-нибудь специализированный центр или к коллегам, которые работают с аналогичными клеточными линиями. Может, у них есть какой-то проверенный протокол или они знают о каких-то нюансах которые ты упустила

И да, пластик — это тоже вариант! Я помню, как мы сменили поставщика культуральных флаконов, и у нас буквально вся партия клеток пошла наперекосяк. Как будто они обиделись на новую посуду :)

Так что, не сдавайся! Уверена, ты найдешь решение! Это просто огонь, когда удается преодолеть такие трудности!

Newbie_Polina

Newbie_Polina опубликовано: Вчера в 20:23

Cosmo_Pilot_Kate

Cosmo_Pilot_Kate опубликовано: 10 часов назад

Елена, привет. Смотрел ваш пост. По опыту могу сказать:

Проверка CO2 инкубатора — это хорошо, но надо бы замерить точные параметры. pH среды должен быть в пределах 7.2-7.4. Если CO2 стабилен, а pH скачет — проблема может быть в буфере среды. Какую именно среду используете? Производитель? Партия?
Пластик — SpaceTraveler прав. Если меняли поставщика, это могло повлиять. Полимерное покрытие чашек (tissue culture treated) имеет специфические характеристики, влияющие на адгезию клеток.
Контаминация — хоть и кажется, что все чисто, но грибковые или бактериальные контаминанты на ранней стадии могут быть невидимы глазу. Сделайте экспресс-тест на микоплазму. Не всегда это очевидно.

Кстати, Newbie_Polina, насчет подготовки клеток: низкая жизнеспособность после трипсинизации — это тоже фактор. Сколько времени клетки находятся в трипсине? Какая концентрация? Может, стоит попробовать другой реагент для диссоциации или изменить время экспозиции.

В теории, если все параметры среды и инкубации в норме, а клетки все равно дохнут, стоит проверить жизнеспособность напрямую (тест с Trypan Blue). Удивительно, но иногда это самая банальная вещь.

kraken адрес

Math_Geek_Kate

Math_Geek_Kate опубликовано: 4 часа назад

Math_Geek_Kate:

Ну, Полина, если клетки вообще не растут, это, конечно, не норма, а прям красный флаг. Тут дело может быть не только в травмировании, как ты предположила, хотя это тоже вариант. Имхо, надо копнуть глубже.

Cosmo_Pilot_Kate, ты правильно про pH и буфер заговорила. Но вот что интересно: мало кто знает, но даже качество воды, используемой для приготовления сред, критически важно. Вот прям очень. Если вода не ultrapure (там, ну, типа, resistivitiy 18.2 МОм*см), то там могут быть всякие ионы, которые прямо убивают клетки или тормозят их рост. Особенно это актуально, если используются какие-то специфические добавки для более сложных научных исследований.

Технически, даже микропримеси в воде могут влиять на активность ферментов в среде или на мембранный потенциал клетки. Так что, даже если инкубатор идеальный, а пластик — топ, а клетки отмывались как королевы, но вода была так себе, то все — капут.

А насчет биореакторов, про которые StarGazer_ Ирина упомянула — это да, это уже про инновации. Там перфузия позволяет поддерживать стабильные условия и удалять метаболиты, что часто решает кучу проблем с ростом и дифференцировкой. Но это уже совсем другие бюджеты обычно :)

Так что, Елена, если у вас проблема, может, стоит проверить не только CO2, но и воду, из которой среды делаете? И реально, какой у вас там pH прыгает или нет?